体外受精与胚胎早期发育

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胚胎培养"生命鸡尾酒" —— HTF与TYH配方详解
胚胎培养技术，是体外受精实验成功的核心环节。HTF培养液与TYH精子获能液，如同为胚胎发育量身定制的 “生命鸡尾酒”—— 前者护航胚胎培育，后者助力精子激活，各有不可替代的作用。本文将详细介绍这两款培养液的科学配方与应用要点。

首先，将HTF与TYH的关键成分进行对比，直观感受”生命鸡尾酒“调配的艺术：
HTF培养液（货号：M1135）如同为胚胎打造的 “专属月子餐”，注重营养均衡与环境稳定。
TYH精子获能液（货号：M2035）则是为精子定制的 “能量补给站”，聚焦活力激活与能量供应。

错用培养液的风险

错用HTF培养精子会出现精子活力显著下降、甚至 “停滞不动” 的情况。核心原因在于：一方面，HTF缺乏肝素这一 “精子兴奋剂”，无法促进精子获能；另一方面，其葡萄糖浓度仅为TYH的一半，难以满足精子高能量消耗需求，如同让运动员 “空腹参赛”，无法发挥正常活性。

错用TYH培育胚胎会导致胚胎发育停滞、甚至凋亡。主要原因是：TYH不含胚胎所需的 “能量物质” 乳酸钠，相当于切断胚胎的 “营养供给”；同时，其高盐环境如同让婴儿饮用海水，远超胚胎耐受范围，破坏胚胎发育微环境。

总结
HTF培养液的优势
适宜的钙离子浓度：如同卵子激活的 “钥匙”，为胚胎受精及后续分裂提供适宜的离子环境，保障胚胎正常发育节奏。
乳酸钠：堪称胚胎的 “液态黄金”，是早期胚胎的能量来源，直接决定胚胎存活与发育效率。

TYH培养液的亮点
高糖高盐配方：相当于精子的 “加速能量泵”，高葡萄糖满足精子运动的高能量需求，高盐环境则维持精子活性稳定。
肝素：作为精子的 “活力补给站”，可快速激活精子活力，促进精子获能，是精子具备受精能力的关键因素。

两款培养液的共性特点
HTF与TYH培养液均添加牛血清白蛋白（BSA），如同为细胞提供 “蛋白质奶盖”，起到保护细胞、维持渗透压稳定的作用。

科普环节
- TYH为何添加酚红
  酚红并非为了提升外观颜值，而是作为重要的 pH 指示剂。精子在代谢过程中会持续产生酸性物质，当培养基 pH 值下降到一定程度时，酚红会使培养基颜色由红变黄，此时需及时更换培养液，避免酸性环境影响精子活力。
- 乳酸钠在HTF中的重要性
  早期胚胎无法直接利用葡萄糖，如同“无法消化主食的婴儿”。乳酸钠如同“初乳”，是早期胚胎仅有的能量来源。直到胚胎发育至 8-cell期后，才算完成 “断奶”，具备利用葡萄糖的能力。
小鼠卵巢各级卵泡计数

石蜡切片的制作步骤
●清洗：将在4%多聚甲醛中固定的卵巢组织取出，用PBS清洗1h，洗去渗入卵巢的多聚甲醛。
●脱水：卵巢组织经梯度乙醇脱水，梯度乙醇均为新鲜配制，梯度浓度依次为50% 、70% 、85% 、95% 、95%、无水乙醇、无水乙醇，每步均为1h。
●透明：将脱水后组织放入无水乙醇和二甲苯混合液（体积比1:1）中1h，然后投入二甲苯中浸泡，二甲苯浸泡时间根据卵巢透明效果而定，一般为20min。
●浸蜡：将卵巢依次投入二甲苯和石蜡混合液（体积比1:1）、石蜡I、石蜡II、石蜡III中各1h。
●包埋：将液体石蜡倒入包埋盒中，迅速将卵巢放入，并调整卵巢的方向和位置，室温冷却。
●切片：将蜡块进行修整。准备好切片用的毛笔、染色架和防脱载玻片等。将旋转切片机厚度调整到 5 µm 左右进行连续切片。
●展片：用眼科镊夹取切好的蜡带，轻轻平铺放置于展片器的水面上，水温调整在45℃。当组织自然平整地展开时，用载玻片插入水面将组织捞出粘附于玻片上。
●烤片：将展好的片子晾干后放置到烤片机上烤干，时间是30min，烤片机的温度为50℃。
HE染色
●脱蜡和染色：将切片依次放入二甲苯、二甲苯、二甲苯乙醇混合液、乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇中各3min，持续水流冲洗10s，切片放入苏木精中染色20min后持续水流冲洗15分钟直至切片变蓝。
●分化和漂洗：将切片放入1%盐酸乙醇中数秒，直至切片变红，立即放入持续水流中使其恢复蓝色。
●脱水和复染：切片依次放入50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇中各3min，用伊红染色液染1min。
●脱水和透明：将切片放入95%乙醇中清洗1min，放入无水乙醇中5min，晾干后放入二甲苯I、二甲苯II中各5min。
●封片：用中性树胶封片，置于切片盒中保存。
卵泡计数
●在倒置显微镜下对整个卵巢连续切片中的各级卵泡进行计数。各级卵泡分类见下图，为了避免重复计数同一卵泡，只计数可见卵母细胞核的卵泡。