小鼠卵母细胞孤雌激活(PA)    参考(Tan Jin-He et al,2008)

方案一：

6-8周龄雌鼠腹腔（IP）注射10IU PMSG（适宜时间：6-7pm）

↓48h later

腹腔（IP）注射10IU HCG

↓18h

雌鼠颈椎脱臼致死，75％酒精消毒背部，从背部剪下两侧卵巢及输卵管迅速置于预热的CZB-H

↓

在体视镜下用1ml注射器（1号针头）将输卵管刺破，释放出COCs

↓

用移卵针将COCs置于50ul 0.1％Hya 消化去除卵丘细胞

↓

将MII期卵母细胞移入Ca²⁺-free CZB中洗涤几次

↓

MII期卵母细胞在激活液[Ca²⁺-free CZB+ SrCL₂(10 m M/L)+CB(5μg/ml)]中激活2.5h

↓

倒置显微镜观察卵母细胞是否激活，1PN或2PN表明成功激活

↓

激活后的卵母细胞在平衡过的KSOM或CZB培养液中洗涤3次，转移至KSOM或CZB液滴开始IVC

↓

观察，记录胚胎体外发育情况

方案二：

6-8周龄雌鼠腹腔（IP）注射10IU PMSG（适宜时间：6-7pm）

↓48h later

腹腔（IP）注射10IU HCG

↓13h

雌鼠颈椎脱臼致死，75％酒精消毒背部，从背部剪下两侧卵巢及输卵管迅速置于预热的CZB-H

↓

在体视镜下用1ml注射器（1号针头）将输卵管刺破，释放出COCs

↓

用移卵针将COCs置于50ul 0.1％Hya 消化去除卵丘细胞

↓

将MII期卵母细胞移入Ca²⁺-free CZB中洗涤几次

↓

MII期卵母细胞在激活液[Ca²⁺-free CZB+ SrCL₂(10 m M/L)+CB(5μg/ml)]中激活2.5h

↓

紧接着在CZB+2 mM /L 6-DMAP培养3.5h

↓

倒置显微镜观察卵母细胞是否激活，1PN或2PN表明成功激活

↓

激活后的卵母细胞在平衡过的KSOM或CZB培养液中洗涤3次，转移至KSOM或CZB液滴开始IVC

↓

观察，记录胚胎体外发育情况