小鼠体内受精原核期胚胎获取
小鼠体内受精原核期胚胎获取(In Vivo)
6-8周龄雌鼠腹腔(IP)注射10IU PMSG(适宜时间:6-7pm)
↓48h later
腹腔注射10IU HCG,立即与雄鼠按1:1比例合笼交配
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次日早晨检查雌鼠是否有阴道栓,有阴栓者表明已成功交配
↓22h post-HCG
将有阴栓的雌鼠颈椎脱臼致死,75%酒精消毒背部,从背部剪下两侧卵巢及输卵管迅速置于预热的HTF液中
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在体视镜下用1ml注射器(1号针头)将输卵管刺破,zygote释放出来
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用口吸管(移卵管)将zygote置于50ul 0.1%Hya 消化去除卵丘细胞,再经HFM液滴洗涤3次
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在体视显微镜下观察zygote形态,挑选有PB2 或2PN的形态正常受精卵置于KSOM培养液,先在平衡(平衡至少4h以上,最好是1天的平衡时间)过的培养液滴中洗涤几次然后再开始体外培养。微滴培养法:10个embryo/20ul medium(Lane和Gardner,1992)
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观察、记录体外发育情况(2-cell,4-cell,8-cell,morula和blastocyst)