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雌性和雄性小鼠
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昆明白，6-8周龄，12光照，温度20-25℃，自由采食和饮水
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耗材与设备
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1ml注射器，眼科剪，眼科镊
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试剂
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PMSG/ECG，HCG，体外受精液HTF，KSOM-AA胚胎培养液
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培养皿准备（IVF前1天下午准备并在培养箱里平衡过夜）
●鲜精采集皿：1ml HTF（35mm国产）。
●卵子采集皿：1ml HTF或HEPES-KSOM（35mm国产）。
●体外受精皿和清洗用培养皿：60mm(进口)皿----上部做受精液滴（HTF），下部做清洗液滴（HTF）。
●发育培养皿：35mm(进口)皿，培养密度：10embryo/40ul。
体内成熟的MⅡ期卵母细胞收集准备
●步骤一：6-8周龄雌鼠腹腔(IP)注射10IU PMSG（适宜时间：6-7pm）。
↓48h later
●步骤二：腹腔（IP）注射10IU HCG。
↓13-18h later
●步骤三：雌鼠颈椎脱臼致死，75％酒精消毒背部，从背部剪下两侧卵巢及输卵管迅速置于预热的HFM。
●步骤四：在体视镜下用1ml注射器（1号针头）将输卵管刺破，释放出COCs。
●步骤五：用口吸管将COCs置于100ul 0.1％Hya 消化去除卵丘细胞(体视镜下观察)。
●步骤六：MII期卵母细胞经HFM液滴洗涤3次，移入HTF受精液中，置于CO2培养箱培养1h备用(10embryo/50ul)。
采集小鼠精液进行IVF
●步骤一：MII期卵母细胞准备好之后，颈椎脱臼致死雄鼠。
●步骤二：75％酒精消毒背部，剪开背部取出附睾尾及输精管迅速置于预热的获能液HTF中，剪5-7下，使精子上浮并获能30min~1h。
●步骤三：用移液器取10~20ul(依精液浓度而定)精液于受精液中共同孵育6小时。
●步骤四：倒置显微镜下挑选排出PB2 或有2PN的受精卵经KSOM培养液洗涤几次，移入KSOM培养液（平衡4h以上）继续培养。此时计为0h，统计受精率。
●步骤五：观察，记录体外受精和发育情况。
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